直肠指检是诊断前列腺癌的主要方法。肿瘤多位于前列腺后叶或侧方，指检早期为局部性硬结节，晚期腺体肿大、坚硬、结节性、腺体固定。指检时应注意有无直接蔓延。
早期前列腺癌肛门指检，有时难与前列腺炎性肉芽肿、结核、结石及慢性前列腺炎等鉴别。晚期病变可伴有全身症状如贫血、消瘦等。当有骨转移时可有骶髂区痛并向髋部、会阴或下肢放射。最后确诊有赖于病理检查，常用方法为经直肠作针吸细胞学检查，或经会阴作前列腺穿刺活检。以上两种方法的准确率为86％左右，两者结合准确率可达96％。
化验：血清酸性磷酸酶测定对前列腺癌的诊断有重要意义，当病变超出前列腺包膜或有转移时，75％患者血清酸性磷酸酶增高。
